Assessment of mycoplasma vaccine efficacy in reducing infection with Newcastle disease virus

The present work recorded the impact of using Mycoplasma gallisepticum vaccines on post-vaccinal response and protection against challenge with Newcastle disease virus. Specific pathogen-free chickens were divided into eight groups of forty chickens each. Group G1 was vaccinated with Mycoplasma gallisepticum live attenuated and Mycoplasma gallisepticum inactivated vaccines. Group G2 was vaccinated with Mycoplasma gallisepticum live attenuated, Mycoplasma gallisepticum inactivated and Newcastle disease inactivated vaccines. Group G3 was vaccinated with Mycoplasma gallisepticum live attenuated vaccine. Group G4 was vaccinated with Mycoplasma gallisepticum live attenuated and Newcastle disease inactivated vaccines. Group G5 was vaccinated with Mycoplasma gallisepticum inactivated vaccine. Group G6 was vaccinated with Mycoplasma gallisepticum inactivated and Newcastle disease inactivated vaccines. Group G7 was vaccinated with Newcastle disease inactivated vaccine. Group G8 was kept as non-vaccinated control. The Newcastle disease hemagglutination inhibition antibodies and mortality percentages were measured. Group G7 recorded the best protective Newcastle disease hemagglutination inhibition antibody titer (7 log2). Group G2 recorded a marginal satisfactory antibody titer (6 log2) after vaccination by the three tested vaccines. The remaining groups revealed unsatisfactory titers ranged from 0-5. The protection levels for G2, G4, G6 and G7 ranged from 70percent to 100percent, but only G2 and G7 were considered protected. G1, G3, G5 and G8 showed typical clinical signs of Newcastle disease. The Mycoplasma gallisepticum vaccines couldn't improve the response to Newcastle disease inactivated vaccine. The results suggest that Mycoplasma gallisepticum vaccination is immunosuppressive rather than immunomodulatory in Newcastle disease vaccination(AU)

En el presente trabajo se registró el impacto de la utilización de vacunas contra Mycoplasma gallisepticum sobre la respuesta posvacunal y la protección frente al reto con el virus de la enfermedad de Newcastle. Pollos libres de patógenos específicos se distribuyeron en ocho grupos de cuarenta pollos cada uno. El grupo G1 se vacunó con vacunas vivas atenuadas e inactivadas contra Mycoplasma gallisepticum. Al grupo G2 se le aplicaron las vacunas: viva atenuada contra Mycoplasma gallisepticum, inactivada contra Mycoplasma gallisepticum e inactivada contra la enfermedad de Newcastle. El grupo G3 se inmunizó con la vacuna viva atenuada contra Mycoplasma gallisepticum; el G4, con las vivas atenuadas contra Mycoplasma gallisepticum e inactivada contra la enfermedad de Newcastle; el G5, con la vacuna inactivada contra Mycoplasma gallisepticum; el G6 con las vacunas inactivadas contra Mycoplasma gallisepticum y la enfermedad de Newcastle; el G7, con la vacuna inactivada contra la enfermedad de Newcastle y el G8 se mantuvo como control no vacunado. Se midieron los anticuerpos de inhibición de la hemaglutinación contra el virus de la enfermedad de Newcastle y los porcentajes de mortalidad. El grupo G7 registró el mejor título de anticuerpos inhibidores de la hemaglutinación contra la enfermedad de Newcastle (7 log2). El grupo G2 registró un título de anticuerpos marginalmente satisfactorio (6 log2) tras la vacunación con las tres vacunas ensayadas. Los demás grupos revelaron títulos insatisfactorios que oscilaban entre 0 y 5. Los niveles de protección de los grupos G2, G4, G6 y G7 oscilaron entre el 70 por ciento y el 100 por ciento, pero sólo G2 y G7 se consideraron protegidos. Los grupos G1, G3, G5 y G8 mostraron signos clínicos típicos de la enfermedad de Newcastle. Las vacunas contra Mycoplasma gallisepticum no pudieron mejorar la respuesta a la vacuna inactivada contra la enfermedad de Newcastle. Los resultados revelan que la vacunación con Mycoplasma gallisepticum es más inmunosupresora que inmunomoduladora en la vacunación contra la enfermedad de Newcastle(AU)

Pathology and Molecular Diagnosis of Mycoplasma gallisepticum and Mycoplasma synoviae Infections in Broiler Chickens from Western Maharashtra, India

Mycoplasma gallisepticum and Mycoplasma synoviae are worldwide in distribution including India and causes heavy economic losses to the poultry industry. The present study confirms the incidence of M. gallisepticum and M. synoviae infections by gross and microscopic pathology and PCR in broiler chickens. Incidence of pathogenic Mycoplasma spp. in broiler chickens with respiratory lesions was found to be 26.66%. Out of total 60 flocks, 6 flocks (10%) were found positive for M. gallisepticum and 12 (20%) were positive for M. synoviae. The incidence of M. synoviae was found to be higher than M. gallisepticum. Catarrhal tracheitis, focal pneumonic consolidation of lungs and airsacculitis were consistent lesions in M. gallisepticum and M. synoviae positive broiler chickens. However, synovitis/arthritis was not observed in any of the flock positive for M. synoviae. Incidence of E. coli amongst broiler chickens with respiratory lesions was found to be 40% by PCR targeting 16S rRNA gene and was higher than Mycoplasma spp. Mixed infection of M. gallisepticum and E. coli was detected in 3(9.09%) flocks, M. synoviae and E. coli in 4 (12.13%), M. gallisepticum and M. synoviae in 1(3.03%) and M. gallisepticum, M. synoviae and E. coli combined infection was detected in 1 (3.03%) flock. Mixed infection of M. gallisepticum and E. coli, M. synoviae and E. coli and M. gallisepticum, M. synoviae and E. coli revealed moderate to severe lesions of chronic complicated respiratory disease

Pesquisa de Mycoplasma em aves da família Psittacidae mantidas em diferentes cativeiros no Brasil Central / Research of Mycoplasma in the family Psittacidae kept in different captivities in Central Brazil

O presente estudo teve como objetivo investigar a presença de Mycoplasma gallisepticum e M. synoviae em diferentes espécies de psitacídeos cativos no Brasil Central. Um total de 300 amostras foram coletadas e corresponderam a 41 espécies de psitacídeos da fauna brasileira, provenientes do CETAS, criadouro comercial e criadouro conservacionista. Quatorze espécies apresentaram amostras positivas para M. gallisepticum destacando a maracanã-verdadeira (Primolius maracana) (01/02, 50%), a arara-canindé (Ara ararauna) (15/48, 33,3%) e a jandaia-verdadeira (Aratinga jandaia) (03/10, 30%). Amostras do CETAS obtiveram total de 21,62% (16/74) de amostras positivas, do criadouro comercial 15,7% (19/121) e do criadouro conservacionista 6,66% (7/105). Apenas três espécies foram positivas para M. synoviae sendo essas, a maracanã-pequena (Primolius maracana) (1/10 - 10%), arara-macao (Ara macao) (1/12, 8,3%) e arara-canindé (Ara ararauna) (2/48, 4,1%). O CETAS obteve 2,7% (2/74) de amostras positivas totais, enquanto o criadouro conservacionista obteve total de 1,9% (2/105) de amostras. Não ocorreram amostras positivas para M. synoviae no criadouro comercial. Os resultados mostraram um considerável número de amostras positivas para M. gallisepticum em espécies da família Psittacidae, indicando que estes animais podem ser uma fonte de infecção silenciosa para outras aves, uma vez que não apresentaram sintomatologia clínica.(AU)

The study aimed to investigate the presence of Mycoplasma gallisepticum and M. synoviae in different species of captive parrots, in Central Brazil. A total of 300 samples were collected from 41 brazilian species of Psittacidae at three captivities: Centro de Triagem de Animais Silvestres (CETAS), a conservation and a commercial captivity. Fourteen species presented positive samples for M. galisepticum, the most affected were blue-winged macaw (Primolius maracana) (01/02, 50%), blue-and-yellow macaw (Ara ararauna) (15/48, 33.3%), and jandaia parakeet (Aratinga jandaia) (03/10, 30%). CETAS facility showed 21.62% (16/74) of positive samples, while the commercial captivity showed 15.7% (19/121), and the conservation captivity 6.66% (7/105). Only three species presented positive samples for M. synoviae: blue-winged macaw (Primolius maracana) (1/10, 10%), scarlet macaw (Ara macao) (1/12, 8.3%) e blue-and-yellow macaw (Ara ararauna) (2/48, 4.1%). CETAS facility showed 2.7% (2/74) of positive samples, while the conservation captivity presented 1.9% (2/105), and no positive samples were found in the commercial captivity. Results showed a considerable number of positive samples for M. galisepticum in species of Psittacidae family, indicating that these animals can be a silent source of infection for other birds, since they did not present clinical symptoms.(AU)

Performance, serologic and tracheal responses of laying hens exposed to F strain of Mycoplasma gallisepticum / Desempenho, sorologia e respostas traqueias de galinhas poedeiras expostas a cepa F de Mycoplasma gallisepticum

The F strain of Mycoplasma gallisepticum (MG-F) protects chickens against mycoplasma infections, in which monitoring is made by serology and histopathology of trachea. This trial used 90 chickens, being 30 unvaccinated (G1 group), 30 eye-drop vaccinated at 8 weeks of age with MG-F (Ceva Animal Health, São Paulo, SP, Brazil) (G2), and 30 immunized at 8 and 11 weeks of age (G3). Samples were obtained from chickens on the 8, 12, 15, 18, 20 and 24th weeks of age for the enzyme-linked immunosorbent assay (ELISA) test. Tracheal fragments were collected after necropsies on the 15 and 24th weeks of age. Up to 12 weeks, the ELISA reactions in optical density (OD) were 0.165 (G1), 0.151 (G2) and 0.151(G3), all below 0.20 and with no significant difference among groups (p > 0.05). After the 15th week, the ELISA reactions rose, yielding the following group averages by collecting dates: G1 (0.18, 0.19, 0.18, and 0.16), G2 (0.36, 0.49, 0.47, and 0.44) and G3 (0.41, 0.52, 0.59, 0.60), being the means in G2 and G3 not significantly different between than, but significantly different from G1. The initial weight (592.71, 621.33, and 594.40), the final weight (1,932.58, 1,987.59, and 1,875.20) and the weekly weight gain (11.65, 11.90, and 11.14) were not significantly different among groups. At necropsy the gross tracheal score means by group and dates were: 15th week (0.25, 0.61, and 0.54) and 24th week (0.54, 0.58, and 0.67), being these difference not significantly (p > 0.05). On microscopy, the tracheal score averages by groups G1, G2 and G3, respectively, were: 15th week (0.25, 0.32, and 0.47) and 24th week (0.07, 0.75, and 0.08). G2 yielded higher score average than G1 and G3 on the 24th week. Higher tracheal changes for G2 and G3 as compared to G1 could be ascribed to MG-F infection. There were no evident prejudicial effects on live weight, weight gain and tissue changes by applying one or two vaccination doses.(AU)

A cepa F de Mycoplasma gallisepticum (MG-F) protege as galinhas de micoplasmose, e sua monitorização é feita por sorologia e histopatologia de traqueia. Este estudo utilizou 90 frangos, sendo 30 não vacinados (grupo G1); 30 vacinados via gota ocular a 8 semanas de idade com MG-F (Ceva Saúde Animal, São Paulo, SP, Brasil) (G2); e 30 imunizados em 8 e 11 semanas de idade (G3). As amostras foram obtidas nas 8ª, 12ª, 15ª, 18ª, 20ª e 24ª semanas para ensaio de imunoabsorção enzimática (ELISA). Fragmentos traqueais foram coletados após necropsias nas 15ª e 24ª semanas. Até a 12ª semana, as reações de ELISA em densidade óptica (DO) foram 0,165 (G1), 0,151 (G2) e 0,151 (G3), todas abaixo de 0,20, e não houve diferença significativa entre os grupos (p > 0,05). Após a 15ª semana , a reação de ELISA subiu, produzindo as seguintes médias dos grupos por datas de coleta: G1 (0,18, 0,19, 0,18 e 0,16), G2 (0,36, 0,49, 0,47 e 0,44) e G3 (0,41, 0,52, 0,59, 0,60), sendo as médias de G2 e G3 não significativamente diferentes entre si, mas significativamente diferentes da de G1. O peso inicial (592,71, 621,33, 594,40), o peso final (1.932,58, 1.987,59, 1.875,20) e o ganho de peso semanal (11,65, 11,90, 11,14) não foram significativamente diferentes entre os grupos. Na necropsia, as médias do escore da macroscopia de traqueia por grupo e data foram: 15ª semana (0,25, 0,61 e 0,54) e 24ª semana (0,54, 0,58 e 0,67), e não se apresentou diferença significativa (p > 0,05). Na microscopia, a média de escores de traqueia por grupos G1, G2 e G3, respectivamente, foram: 15ª semana (0,25, 0,32 e 0,47) e 24ª semana (0,07, 0,75 e 0,08). G2 apresentou maior média de escore do que G1 e G3 na 24ª semana. Alterações traqueais mais elevadas para G2 e G3 em relação a G1 poderiam ser atribuídas à vacinação por MG-F. Não houve efeitos prejudiciais evidentes no peso vivo nem no ganho de peso, tampouco alterações teciduais na aplicação de uma ou duas doses de vacinação.(AU)

Transmission, serologic and tissue responses in chickens vaccinated with Mycoplasma gallisepticum F strain (MG-F) / Transmissão, resposta sorológica e tecidual de poedeiras vacinadas com Mycoplasma gallisepticum cepa F

MG-F protects chickens from MG Mycoplasmosis and monitoring is done by serology (SAR and ELISA) and PCR. Histopathology is used to evaluate bird response to MG. This study evaluated MG-F profile vaccination in SPF chicken. This trial used 100 chickens, being 40 unvaccinated (G1), 40 eye-drop vaccinated at 8 weeks of age with MG-F ( Ceva Animal Health , São Paulo , SP , Brazil ) (G2) and 20 immunized by contact (G3) . Samples were obtained on the 8th, 12th, 15th, 18th, 20th and 24th week for SAR, ELISA and PCR. Fragments of trachea and air sac, for microscopy, were got after necropsies on the 15th and 24th week. Up to 12 weeks there was no significant difference among groups by SAR. SAR reactions appeared from the 15th week with these averages: G1 (1.7, 1.76 , 0.1, 0.15) , G2 (7.81, 7.65, 8.25, 6.29) and G3 (8.1, 8.5, 9.5, 6.16), while by ELISA it occurred after the 18th week with optical densities averages: G1 (0.19, 0.14, 0.16) , G2 (0.47, 0.45, 0.41) and G3 (0.55, 0.51, 0.51) . Positivity in G3 by PCR occurred seven weeks after exposure. At the 15th week the air sac score means were 0.20, 0.55, and 0.32 and 24th week were 0.15, 0.80 and 0.66 (p>0.05). For trachea, G2 (0.48) yielded higher score average than G1 (0.10) and G3 (0.00) on the 15th week. Changes in G3 were seen only at 24th week, being this average (1.00) significantly different (p<0,05) from G1 (0.08) and G2 (0.46). SAR and PCR detected MG-F in G3 earlier than ELISA...

Mycoplasma gallisepticum cepa F (MG-F) é altamente utilizada em vacinação de poedeiras. MG-F confere bons níveis de proteção às galinhas, deslocando MG de campo ou diminuindo o número deles no trato respiratório. Soroaglutinação Rápida (SAR), ELISA e PCR são testes no monitoramento da micoplasmose, enquanto a histopatologia, mesmo não sendo rotineira, é usada para avaliar a resposta das aves à infecção por MG. O objetivo deste estudo foi avaliar a transmissibilidade, soroconversão e alterações teciduais de MG-F em galinhas. Um total de 100 galinhas SPF foi utilizado, sendo 40 delas não vacinadas (G1), 40 vacinadas na 8ª semana de idade com MG-F (Ceva Saúde Animal, São Paulo/SP, Brasil) (G2) e 20 imunizadas por contato com aves do G2 (G3). Soros e suabes traqueais foram obtidos na 8ª, 12ª, 15ª, 18ª, 20ª, 24ª semana para monitoramento por SAR, ELISA e PCR. Fragmentos de traqueia e saco aéreo, para microscopia, foram feitas após necropsias na 15ª e 24ª semana. Até a 12ª semana não houve diferença significativa entre os grupos pela SAR. Houve reação a SAR a partir da 15ª semana com as seguintes médias: G1 (1,7; 1,76; 0,1; 0,15), G2 (7,81; 7,65; 8,25; 6,29) e G3 (8,1; 8,5; 9,5; 6,16), enquanto por ELISA a soroconversão ocorreu a partir da 18ª semana com médias de densidades óticas de G1 (0,19; 0,14; 0,16), G2 (0,47; 0,45; 0,41) e G3 (0,55; 0,51; 0,51). Todas as aves do G3 apresentaram positividade pela PCR sete semanas após exposição. Não houve diferença significativa entre as medias dos escores de saco aéreo entre os grupos, na 15ª semana (0,20; 0,55; 0,32) e 24ª semana (0,15; 0,80 e 0,66). Em relação à traqueia, G2 apresentou média maior na 15ª semana (0,48) que G3 (0,00) e G1 (0,10). Alterações em G3 foram observadas somente na 24ª semana onde as médias foram de 0,08(G1); 0,46 (G2) e 1,00 (G3), havendo significância (p<0,05) entre G1 e G3. SAR e PCR foram capazes de detectar a transmissão de MG-F de forma precoce em relação ao ELISA...

Occurrence and risk factors assessment associated with Mycoplasma gallisepticum (MG) infection in chickens in the semiarid region of Pernambuco, Brazil / Ocorrência e fatores de riscos associados à infecção por Mycoplasma gallisepticum em galinhas na região Semiárida do estado de Pernambuco

The aim of the present study was to assess the occurrence of Mycoplasma gallisepticum (MG) infection and risk factors of this disease in three hundred serum samples from on 23 familiar agricultural properties in the semiarid region of the state of Pernambuco, Brazil. ELISA was used to study antibodies anti-Mycoplasma gallisepticum. The univariate analysis (chi-squared test or Fischer's exact test) followed by multivariate analysis (logistic regression) were used to assess the risk factors with two variables: management and sanity of the poultry. It was detected a frequence of 53.33% (157/300) of the birds were positive for MG, with 100% foci. The risk factors confirmed by multivariate analysis, in the present study, were the presence of other poultry species on the property, including Numida meleagris (OR=2.22; p=0.005), parrots (OR=1.72; p=0.027), and of passerines (OR=1.88; p=0.007). These results showed that Mycoplasma gallisepticum infection is endemic among backyard poultry in the semiarid region of the state of Pernambuco. These birds could be a source of infection for other wild or domestic poultry. . This is the first report of the occurrence of avian mycoplasmosis in backyard poultry in the state of Pernambuco in northeastern Brazil. The risk factors identified should serve as a parameter for the health authorities to seek solutions related to controlling the disease.

Objetivo do presente estudo foi avaliar a ocorrência de infecção por Mycoplasma gallisepticum (MG) e os fatores de risco dessa doença em trezentas amostras de soro sanguíneo de galinhas domésticas em 23 propriedades da agricultura familiar na região semiárida do estado de Pernambuco, Brasil. Para a pesquisa de anticorpos contra Mycoplasma gallisepticum utilizou-se o Ensaio Imunoenzimático (ELISA). A análise univariada (Qui-quadrado ou Exato de Fischer) seguida pela análise multivariada (Regressão Logística) foram utilizadas para avaliar os fatores de risco com duas variáveis: manejo e sanidade das aves. Foi detectada uma frequência de 53,33% (157/300) de aves soropositivas para MG com 100% de focos. Os fatores de risco confirmados na análise multivariada, neste estudo, foram a criação de outras espécies de aves na propriedade como Numida meleagris(OR=2,22; p=0,005), criação de diferentes espécies de psitacídeos (OR=1,72; p=0,027) e a criação de passeriformes (OR=1,88; p=0,007). Estes resultados demonstram que a infecção por Mycoplasma gallisepticum é endêmica entre galinhas de criação doméstica na região semiárida do estado de Pernambuco. Estas aves podem atuar como fonte de infecção para outras aves silvestres e domésticas. Este é o primeiro relato da ocorrência de micoplasmose aviária em galinhas de criação doméstica no estado de Pernambuco, nordeste do Brasil. Os fatores de risco identificados devem servir como um parâmetro para as autoridades sanitárias buscarem soluções de controle da doença.

Evaluation of a PCR multiplex for detection and differentiation of Mycoplasma synoviae, M. gallisepticum, and M. gallisepticum strain F-vaccine / Avaliação de uma PCR multiplex para detecção e diferenciação de Mycoplasma synoviae, Mycoplasma gallisepticum e Mycoplasma gallisepticum cepa F vacinal

Mycoplasma gallisepticum (MG) and Mycoplasma synoviae (MS) are the mycoplasma infections of most concern for commercial poultry industry. MG infection is commonly designated as chronic respiratory disease (CRD) of chickens and infections sinusitis of turkeys. MS causes sub clinical upper respiratory infection and tenosynovitis or bursitis in chickens and turkeys. The multiplex PCR was standardized to detect simultaneously the MS, MG field strains and MG F-vaccine strain specific. The generic PCR for detection of any species of Mollicutes Class was performed and compared to the multiplex PCR and to PCR using species-specific primers. A total of 129 avian tracheal swabs were collected from broiler-breeders, layer hens and broilers in seven different farms and were examined by multiplex PCR methods. The system (multiplex PCR) demonstrated to be very rapid, sensitive, and specific. Therefore, the results showed a high prevalence of MS in the flocks examined (27.9%), and indicate that the MS is a recurrent pathogen in Brazilian commercial poultry flocks...

Mycoplasma gallisepticum (MG) and Mycoplasma synoviae (MS) são micoplasmas que causam infecção de maior preocupação para a indústria avícola. MG é a bactéria responsável pela infecção, comumente designada, como doença crônica respiratória (DCR) de galinhas e sinusite infecciosa de perus. MS é responsável por infecções subclínicas do trato respiratório superior e tenosinovite ou bursite em galinha e perus. A reação da PCR multiplex foi padronizada para detectar simultaneamente MS, MG cepa de campo e MG-F cepa vacinal. A PCR genérica para detecção de qualquer espécie de Mycoplasma foi realizada e comparada a PCR multiplex e a PCR com primers específicos. O total de 129 amostras de suabes de traqueia foi coletado de reprodutoras pesadas, poedeiras e frangos em sete diferentes empresas avícolas e então foram examinados por PCR multiplex. O sistema da PCR multiplex demonstrou ser muito rápido, sensível e específico. Então, os resultados mostraram uma alta prevalência de MS nos lotes examinados ( 27,9%), e indica que MS é um patógeno recorrente nos lotes de aves comerciais brasileiro...

Diagnóstico imuno-histoquímico e caracterização anatomopatológica de Mycoplasma gallisepticum em galinhas de subsistência / Immunohistochemical diagnosis and pathological characterization of Mycoplasma gallisepticum in free-range chicken

A micoplasmose aviária é causada por bactérias da família Mycoplasmataceae. Mycoplasma gallisepticum (MG) é a espécie mais patogênica e que tem a maior importância econômica para a produção avícola. Este estudo teve por objetivo utilizar a técnica de imuno-histoquímica (IHQ) como método de diagnóstico da infecção por MG em aves. No presente relato são descritos dois surtos de micoplasmose por MG em galinhas de subsistência. Clinicamente as aves apresentaram prostração, hiporexia, dificuldade respiratória, secreção nasal e ocular. Na necropsia foram observados secreção serosa, edema e deposição de cáseo em conjuntiva (7/10) e seios nasais (4/10), sacos aéreos espessados com espuma e cáseo (6/10); traqueia difusamente avermelhada (4/10); pulmões com pontos esbranquiçados de 0,5cm (2/10); e saco pericárdico com deposição de fibrina (2/10). No exame histopatológico foram evidenciados traqueíte (10/10), sinusite (5/5) e conjuntivite (3/4) hiperplásica linfoplasmocitária aguda; broncopneumonia fibrinonecrótica (5/10); pericardite fibrinosa aguda (2/10); e aerossaculite fibrinonecrótica (1/1). No exame de IHQ anti-MG foi evidenciada marcação na superfície extracelular dos cílios e/ou topo do epitélio da traqueia (10/10), brônquios (5/10) e seios nasais (4/5). Em sete dos dez casos analisados foi detectada a presença de MG por PCR em tempo real realizado a partir de amostras de suabe traqueal. A técnica de IHQ anti-MG utilizada como método de diagnóstico apresentou boa concordância com os sinais clínicos, as lesões histopatológicas e os resultados de PCR em tempo real.

Avian mycoplasmosis is caused by bacteria from the Mycoplasmataceae family. Mycoplasma gallisepticum (MG) is the most pathogenic and economically significant species affecting poultry. The aim of this study was to use the immunohistochemistry technique (IHC) as a diagnostic method for the MG infection in poultry. In this report we described two outbreaks of mycoplasmosis caused by MG in free-range chickens. Clinical signs were characterized by prostration, decreased appetite, difficult breathing, nasal and ocular discharge. Necropsy findings were serous secretion in conjunctiva (7/10) and seioses (4/10), edema and caseous exudate; air sacs thickened with foam and caseous exudate (6/10); trachea diffusely reddish (4/10); lungs with 0.5 cm whitish spots (2/10); and pericardial sac with fibrin exudate (2/10). Histologically was observed a lymphoplasmacytic hyperplastic acute tracheitis (10/10), seiositis (5/5) and conjunctivitis (3/4); fibrinonecrotic bronchopneumonia (5/10); acute fibrinous pericarditis (2/10); and fibrinonecrotic aerosaculitis (1/1). IHC anti-MG stained in the extracellular surface of ciliated brush border and/or in the top of epithelium of trachea (10/10), bronchi (5/10) and sinuses (4/5). In seven out of ten cases it was possible to detect MG by real-time PCR from tracheal swabs. IHC anti-MG used as a diagnostic method showed good correlation with clinical signs, lesions and real-time PCR results.

Infecção experimental por Mycoplasma gallisepticum e Escherichia coli em perus / Experimental infection with Mycoplasma gallisepticum and Escherichia coli in turkeys

Mycoplasma gallisepticum (MG) é responsável por provocar sinusite infecciosa em perus. A infecção por Mycoplasma spp. torna a ave susceptível a infecção por Escherichia coli. O objetivo deste estudo foi desenvolver em perus, um modelo experimental para a sinusite infecciosa. Utilizou-se 250 peru,s machos da linhagem Nicholas (Aviagen®) divididos em grupo não infectado (T1) e grupo desafiado (T2) que recebeu por via ocular, com um dia de idade, Mycoplasma gallisepticum cepa F e aos 21 dias de idade E. coli por via saco aéreo. Analisou-se a mortalidade, os sinais clínicos e lesões em sacos aéreos, fígado e coração. Concluiu-se que o delineamento experimental utilizado foi eficaz para simular a infecção natural por MG e E. coli, sendo que a vacina contra MG-F utilizada para poedeiras é patogênica para perus.

Mycoplasma gallisepticum (MG) causes infectious sinusitis in turkeys, and is commonly associated with Escherichia coli. The objective of this study was to develop in turkeys an experimental model for infectious sinusitis. Two hundred and fifty male turkeys of Nicholas breed (Aviagen®) were divided into negative control group and challenged, animals were housed until 42 days old. The birds were inoculated in the first day of age with the MG vaccine (F-VAX ® Schering Plough) and on day 21 with E. coli. We analyzed the mortality, clinical signs and lesions in air sacs, liver and heart. The results showed that the vaccine against Mycoplasma gallisepticum (MG-F) is pathogenic for turkeys and that the experiment was able to simulate natural infection with MG and E. coli.

A Multiplex real-time PCR for detection of Mycoplasma gallisepticum and Mycoplasma synoviae in clinical samples from Brazilian commercial poultry flocks

Mycoplasma gallisepticum (MS) and Mycoplasma synoviae (MS) are important avian pathogens and cause economic losses to the poultry industry. Molecular biology techniques are currently used for a rapid detection of these pathogens and the adoption of control measures of the diseases. The aim of this study was to develop and validate a technique for simultaneous detection of MG and MS by multiplex real time polymerase chain reaction (PCR). The complete assay (Multiplex MGMS) was designed with primers and probes specific for each pathogen and developed to be carried out in a single tube reaction. Vaccines, MG and MS isolates and DNA from other Mycoplasma species were used for the development and validation of the method. Further, 78 pooled clinical samples from different poultry flocks in Brazil were obtained and used to determine the sensitivity and specificity of the technique in comparison to 2 real time PCR assays specific for MG (MG PCR) and MS (MS PCR). The results demonstrated an agreement of 100% (23 positive and 44 negative samples) between Multiplex MGMS and MG PCR in the analysis of 67 samples from MG positive and negative poultry flocks, and an agreement of 96.9% between Multiplex MGMS and MS PCR in the analysis of 64 samples from MS positive and negative poultry flocks. Considering the single amplification tests as the gold standard, the Multiplex MGMS showed 100% of specificity and sensitivity in the MG analysis and 94.7% sensitivity and 100% specificity in the MS analysis. This new assay could be used for rapid analysis of MG and MS in the poultry industry laboratories.

DETECCIÓN Y DIFERENCIACIÓN DE Mycoplasma gallisepticum Y Mycoplasma synoviae MEDIANTE LA TÉCNICA DE PCR A PARTIR DE HISOPOS TRAQUEALES DE AVES CON SÍNTOMAS RESPIRATORIOS / Detection and Differentiation of Mycoplasma gallisepticum and Mycoplasma synoviaeby PCR from Tracheal Swabs from Birds with Respiratory Symptoms

Los micoplasmas son importantes patógenos en las aves por ser responsables de cuadros respiratorios que ocasionan grandes pérdidas económicas a la industria avícola alrededor del mundo. Existen principalmente dos especies de micoplasmas como causantes de enfermedad en aves comerciales, el Mycoplasma gallisepticum(MG) y el Mycoplasma synoviae(MS). Teniendo en cuenta su importancia y la necesidad de conocer y diferenciar las diferentes especies de micoplasmas presentes en las explotaciones avícolas, se tomaron 91 muestras de hisopos traqueales de aves con síntomas respiratorios, provenientes de igual número de granjas de pollo de engorde, ponedoras comerciales y reproductoras pesadas ubicadas en los departamentos de Cundinamarca y Boyacá, Colombia, y se determinó la presencia de MG y MS por la técnica de PCR. La prevalencia determinada fue de 39,6 % para MG y 47,3 % para MS, encontrándose diferencias estadísticamente significativas cuando se comparó la positividad a MG y MS y el tipo de explotación (p < 0,05), siendo mayor la presentación en ponedoras y reproductoras que en explotaciones de pollo de engorde. Se encontraron diferencias cuando se compararon los resultados en diferentes grupos etáreos, siendo mayor el porcentaje de positividad para MG y MS en las aves con edades entre 20 y 60 semanas tanto en ponedoras comerciales como en reproductoras, mientras que en el grupo de pollo de engorde se encontró una mayor positividad para MG en aves de cinco semanas y para MS en aves de dos semanas.

Mycoplasmas are worldwide pathogens that affect the poultry industry causing respiratory illness which cause a negative economic impact. Two mycoplasmas species are the most important in the commercial poultry: Mycoplasma gallisepticum(MG) and Mycoplasma synoviae(MS). By its importance and necessity to know and differentiate between mycoplasmas species in locals poultry houses this study used the PCR technique like a diagnosis tool, using tracheal swabs from bird with respiratory symptoms. A total of 91 samples from broilers, layers and breeders farms located in the departments of Cundinamarca and Boyacá was processed. The punctual prevalence founded in this study was 39.6 % for MG and 47.3 % for MS. Statistical differences for type of production and positive samples for MG y MS (p < 0.05) were founded, a bigger number of positive samples from layers and breeder in comparison to broilers was found. In the same way, the positive samples for the layers and breeder from the age group between 20 and 60 weeks was greater, while for the broilers group most of the positive samples were from five weeks old birds for MG and two weeks old birds for MS.

Mycoplasma gallisepticum como fator de risco no peso de lotes de frangos de corte com condenação por aerossaculite na Inspeção Sanitária Federal / Mycoplasma gallisepticum as a risk factor on weight of broilers condemnated with airsacculitis by Federal Sanitary Inspection

A Indústria avícola brasileira cresce anualmente e se torna cada vez mais representativa na produção e exportação dos seus produtos. Os cuidados com a sanidade avícola têm acompanhado e favorecido essa evolução, entretanto, agentes respiratórios que afetam o peso e a qualidade da carcaça, continuam a provocar grandes prejuízos à produção avícola. A aerossaculite é considerada uma das principais causas da condenação total e/ou parcial de carcaças de frangos de corte, sendo de grande importância Mycoplasma gallisepticum (MG). O objetivo do presente estudo foi detectar MG pela PCR e correlacionar sua positividade a aerossaculite, queda de peso e condenação de carcaças de lotes de frangos de corte na Inspeção Sanitária Federal. Do total de 40 lotes de frangos de corte abatidos sob Inspeção Sanitária Federal, localizado no Estado do Rio Grande do Sul, Brasil, foram selecionados ao acaso. Em cada lote, três frangos de corte, independente de sexo, foram randomicamente selecionados para necropsia, sendo as traquéias coletadas e agrupadas em pool para formação de uma amostra para análise. Pela PCR, o DNA foi extraído pelo método de fenol-clorofórmio e amplificado com pares de "primers" específicos para MG. Dos 40 lotes analisados pela PCR, 20% (8/40) foram positivos para MG. Houve relação entre a positividade para MG, aumento da taxa de aerossaculite e queda de peso por Regressão Logística Múltipla (p<0,05), LogitPi= 7,9409 + (0,5601 x X1) - (3,3080 x X2). O aumento da taxa de aerossaculite esteve relacionada à queda de peso por Regressão Linear Simples (p<0,05), Y= 2, 1050-0,6397X. Em conclusão, a positividade por MG está relacionada à aerossaculite que provoca queda de peso em frangos de corte. Em adição, a PCR foi uma técnica eficaz para a detecção de MG em lotes de frangos de corte, não sendo este diagnóstico influenciado pelo tipo de colheita do material biológico, por escarificado ou swab de traquéia.

The Brazilian poultry industry improves annually and is more representative on production and exportation of their products. Care on poultry health cooperates to these developments, however, respiratory agents that affect weight and carcass quality, continue to threaten poultry production. Airsacculitis is considered the main cause of total and/or partial condemnation of broilers carcasses, being Mycoplasma gallisepticum (MG) the most important agent of it. This study aimed to detect MG by "Polymerase Chain Reaction" (PCR) and to correlate its positivity with airsacculitis, weight losses and condemnated broilers by Federal Sanitary Inspection. A total of 40 flocks of slaughter broilers under Federal Inspection in Rio Grande do Sul, Brazil, were randomly selected. In each flock three broilers, regardless of sex, were randomly chosen for necropsy where tracheas were collected and polled in one sample for analysis. For PCR, DNA was extracted by the method of phenol-chloroform and amplified with pairs of specific primers for MG. From the 40 flocks PCR analyzed, 20% (8/40) were positive for MG. MG detection was found to be correlected with airsacculitis increase and weight decrease by multiple logistic regression equation (p<0,05), LogitPi= 7.9409 + (0,5601 x X1) - (3.3080 x X2). Airsacculitis rate increase also correleted with decrease in body weight by simple linear regression equation (p<0.05), Y= 2.1050 - 0.6397X. In conclusion, MG positivity is related to airsacculitis which causes weight loss in broilers. In addition, the PCR was an effective technique for the detection of MG in flocks of broilers, but was not affected by the kind of biological specimens collected, as tracheal scraping or swab.

Epidemiological survey on Mycoplasma gallisepticum and M. synoviae by multiplex PCR in commercial poultry / Investigação epidemiológica de Mycoplasma gallisepticum e M. synoviae por PCR Multiplex em estabelecimentos comerciais de aves

Mycoplasmas are important avian pathogens, which cause respiratory and joint diseases that result in large economic losses in Brazilian and world-wide poultry industry. This investigation regarding the main species of mycoplasmas, Mycoplasma gallisepticum (MG) and M. synoviae (MS), responsible for the above mentioned conditions, was carried out through PCR Multiplex analysis. One thousand and forty-six (1,046) samples of tracheal swabs and piped embryos were collected from 33 farms with laying hens, breeders, broilers or hatchery, located in the Brazilian states of São Paulo, Paraná and Pernambuco, where respiratory problems or drops in egg production had occurred. The MG and MS prevalence on the farms was 72.7 percent. These results indicated (1) high dissemination of mycoplasmas in the evaluated farms, with predominance of MS, either as single infectious agent or associated with other mycoplasmas in 20 farms (60.6 percent), and (2) an increase of MS and decrease of MG infection in Brazilian commercial poultry.

Os Micoplasmas são importantes patógenos aviários que causam doenças respiratórias e de articulações que resultam em grandes perdas econômicas para a indústria avícola brasileira e mundial. O estudo das principais espécies de Mycoplasma, Mycoplasma gallisepticum (MG) e M. synoviae (MS), responsáveis pelas doenças mencionadas acima, foram analisadas pela técnica de PCR Multiplex. Foram colhidas 1046 amostras de suabe traqueal e embriões bicados de 33 estabelecimentos de aves de postura, matrizes, frangos de corte e um incubatório, localizados nos Estados brasileiros de São Paulo, Paraná e Pernambuco, as quais apresentavam problemas respiratórios ou queda na produção de ovos. A prevalência de MS e MG nas granjas foi de 72,7 por cento. Os resultados indicaram uma alta disseminação de Mycoplasma nas granjas avaliadas, com predominância de MS, como um único agente infeccioso ou associado com outros micoplasmas em 20 granjas (60,6 por cento). Assim, este estudo indicou o aumento da incidência de MS e a redução de MG nas granjas comerciais no Brasil.

Prokaryotic expression,purification and polyclonal antibody preparation of putative cytadhesin protein (PvpA) of Mycoplasma gallisepticum / 中国兽医学报

The PCR product of PvpA gene was cloned into prokaryotic expression vector pET41a(+) and the recombinant expression vector was then transformed into E.coli DH5a after identified by restriction enzyme digestion and PCR.The positive recombinant plasmid was transformed into E.coli BL21 (D3) and induced to express PvpA protein.The obtained protein was analyzed by SDS-PAGE and Western blotting,purified by Ni-NTA affinity chromatography.The results showed that the purified PvpA fusion protein was obtained successfully.The expressed protein reacted to the high anti-PvpA immune serum from rabbit specially by western blotting.This study would be helpful to established a new diagnostic method for the detection of M.gallisepticum.